Pagbuo ng isang hindi direktang pamamaraan ng ELISA para sa pagtuklas ng porcine acute diarrhea syndrome coronavirus IgG antibody batay sa recombinant spike protein

Ang Porcine Acute Diarrhea Syndrome Coronavirus (SADS-CoV) ay isang bagong natuklasang porcine enteric pathogenic coronavirus na maaaring magdulot ng matubig na pagtatae sa mga bagong silang na biik at magdulot ng malaking pagkalugi sa ekonomiya sa industriya ng baboy.Sa kasalukuyan, walang angkop na paraan ng serological upang suriin ang bisa ng impeksyon at bakuna ng SADS-CoV, kaya may kagyat na pangangailangan na gumamit ng epektibong enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) upang mapunan ang kakulangan na ito.Dito, ang isang recombinant plasmid na nagpapahayag ng SADS-CoV spike (S) na protina na pinagsama sa domain ng IgG Fc ng tao ay itinayo upang makabuo ng recombinant na baculovirus at ipinahayag sa HEK 293F cells.Ang S-Fc na protina ay dinadalisay ng protina G resin at pinapanatili ang reaktibiti na may mga anti-human Fc at anti-SADS-CoV antibodies.Pagkatapos ay ginamit ang protina ng S-Fc upang bumuo ng hindi direktang ELISA (S-iELISA) at i-optimize ang mga kondisyon ng reaksyon ng S-iELISA.Bilang resulta, sa pamamagitan ng pagsusuri sa OD450nm na halaga ng 40 SADS-CoV negatibong sera na kinumpirma ng immunofluorescence assay (IFA) at Western blotting, ang cut-off na halaga ay natukoy na 0.3711.Ang coefficient of variation (CV) ng 6 SADS-CoV positive sera sa loob at pagitan ng mga run ng S-iELISA ay lahat ay wala pang 10%.Ang cross-reactivity test ay nagpakita na ang S-iELISA ay walang cross-reactivity sa iba pang porcine virus sera.Bilang karagdagan, batay sa pagtuklas ng 111 clinical serum sample, ang kabuuang rate ng pagkakaisa ng IFA at S-iELISA ay 97.3%.Ang virus neutralization test na may 7 iba't ibang OD450nm values ​​ng serum ay nagpakita na ang OD450nm value na nakita ng S-iELISA ay positibong nauugnay sa virus neutralization test.Sa wakas, ang S-iELISA ay isinagawa sa 300 mga sample ng serum ng baboy.Ang mga komersyal na kit ng iba pang porcine enterovirus ay nagpakita na ang mga positibong rate ng IgG ng SADS-CoV, TGEV, PDCoV at PEDV ay 81.7%, 54%, at 65.3%, ayon sa pagkakabanggit., 6%, ayon sa pagkakabanggit.Ang mga resulta ay nagpapakita na ang S-iELISA ay partikular, sensitibo, at maaaring kopyahin, at maaaring magamit upang matukoy ang impeksyon ng SADS-CoV sa industriya ng baboy.Ang artikulong ito ay protektado ng copyright.lahat ng karapatan ay nakalaan.


Oras ng post: Hun-22-2021